DNS 試劑(NY/T 法)使用步驟說明

產(chǎn)品簡介：

植物體內(nèi)的碳素營養(yǎng)狀況以及農(nóng)產(chǎn)品的品質(zhì)形狀，常以糖含量作為重要指標(biāo)，單糖和某些寡糖(如麥芽糖)含有游離的醛基或酮基，具有還原性，屬于還原糖；多糖和蔗糖等屬于非還原糖，可以利用多糖能被酸水解為單糖的特性，通過測定水解后的單糖含量對總糖進(jìn)行測定。

DNS 試劑(NY/T 法)由氫氧化鈉、3,5-二硝基水楊酸、酒石酸鉀鈉、酚等配制而成，DNS 濃度為 6.3g/L，是植物總糖和還原糖檢測(硝基水楊酸法)的成分之一，其檢測原理是還原糖在堿性條件下被氧化成糖酸，3,5-二硝基水楊酸被還原為棕紅色的氨基化合物，在一定范圍內(nèi)還原糖的量與棕紅色產(chǎn)物的顏色深淺程度呈一定比例關(guān)系，在540nm處測定棕紅色物質(zhì)的吸光度，該吸光度值與還原糖含量呈線性關(guān)系，利用比色法和標(biāo)準(zhǔn)曲線測得樣品中的還原糖和總糖的含量。DNS 試劑也常用果膠酶、淀粉酶、纖維素酶、木聚糖酶等的活性測定。該試劑僅用于科研領(lǐng)域，不適用于臨床診斷或其他用途。

自備材料：

1、蒸餾水、鹽酸溶液、氫氧化鈉溶液

2、剪刀、勻漿器或研缽、50ml 離心管、離心機、水浴鍋或恒溫箱、分光光度計、比色皿

操作步驟(僅供參考)：

1、還原糖的提取：①稱取植物樣品 0.5~3g，剪碎，加入蒸餾水約 3ml 勻漿，轉(zhuǎn)移至燒杯或三角瓶中，用12ml 蒸餾水沖洗研磨器 2~3 次，洗出液也轉(zhuǎn)移至該容器。②50℃水浴 30min，并不時攪拌，以便還原糖徹-底浸出。③將沉淀和浸出液轉(zhuǎn)移至 50ml 離心管，4000g 離心 5min。④留取上清液，向沉淀中加入 20ml 蒸餾水，混勻，再次 4000g 離心5min。⑤留取上清液，將 2 次獲得的上清液合并，用蒸餾水定容至 100ml(提取液)，混勻，作為還原糖待測液。

2、總糖的水解和提取：①稱取植物樣品 0.5~3g，剪碎，加入蒸餾水約 3ml 勻漿，轉(zhuǎn)移至燒杯或三角瓶中，用12ml 蒸餾水沖洗研磨器 2~3 次，洗出液也轉(zhuǎn)移至該容器。②向容器中加入 10ml 6M 鹽酸溶液，攪拌均勻，煮沸 30min，并不時攪拌。③取 2 滴滴加于載玻片上，滴加 1 滴顯色液，檢查水解是否完-全，如已經(jīng)水解完-全則不顯示藍(lán)色。④水解完畢后，冷卻至室溫，加入 6M 氫氧化鈉溶液，使溶液 pH 至7.4 左右，用蒸餾水定容至 100ml，混勻，4000g 離心 5min 或過濾，獲得上清或濾液。⑤取上清或濾液 10ml，用蒸餾水定容至 100ml，成稀釋 10 倍的總糖水解液(提取液)，取 1ml 總糖水解液，測定其還原糖的含量。

3、制作葡萄糖標(biāo)準(zhǔn)曲線：取干凈離心管或試管，按下表進(jìn)行操作，以0 號調(diào)零，檢測540nm處吸光度，以吸光度為縱坐標(biāo)，各標(biāo)準(zhǔn)濃度(mg/ml)為橫坐標(biāo)作圖得標(biāo)準(zhǔn)曲線。

 4、還原糖測定：取制備好的還原糖提取液或者總糖水解液 1ml，分別加入DNS 試劑2ml，其余操作同標(biāo)準(zhǔn)曲線的操作，540nm 處測定各管的吸光度。

 計算：

還原糖的百分含量：

還原糖含量(%)=(C×VT)/(m×Vs)×100

總糖的百分含量：

總糖含量(%)=(C×VT)/(m×Vs)×100×10×0.9

式中：C=從標(biāo)準(zhǔn)曲線查的糖量(mg)

VT=提取液的體積(ml)

m=植物樣品的質(zhì)量(mg)

Vs=測定時用的樣品體積(ml)

注意事項：

1、 該試劑避免反復(fù)凍融，以免失效或效率下降，盡量避光保存。

2、 稀釋鹽酸和氫氧化鈉溶液時，應(yīng)小心操作，避免傷人。